One of the ways to improve Human Resources is to familiarize yourself with forming a culture of high-level critical thinking with skills (HOTS) in the learning process. Therefore, in the process of learning biology, a strategy is needed that is able to make students master learning concepts well. This study aims to determine the influence and response of students on the use of guided inquiry learning models on students' critical thinking skills. The samples in this study were 28 students in the third semester of classes A and B of the biochemistry course program. Data collection techniques are carried out using observation sheets and questionnaire sheets. The method used in the study is quantitative descriptive statistics. Based on the analysis results, it shows that the use of guided inquiry learning models assisted by audio-visual media positively influences students' critical thinking ability with a percentage of 93% (Very good). Supported by positive student responses to the use of guided inquiry learning models assisted by audio-visual media with a rate of 95% (Perfect). Abstrak Salah satu untuk meningkatkan Sumber Daya Manusia adalah dengan membiasakan untuk membentuk budaya berpikir kritis tingkat tinggi dengan ketrampilan (HOTS) dalam proses pembelajaran. Oleh karena itu dalam proses pembelajaran biologi dibutuhkan suatu strategi yang mampu membuat mahasiswa dapat menguasai konsep pembelajaran dengan baik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh dan respon mahasiswa terhadap penggunaan model pembelajaran inkuiri terbimbing terhadap kemampuan berpikir kritis mahasiswa. Sampel dalam penelitian ini adalah mahasiswa semester III kelas A dan B program mata kuliah biokimia sebanyak 28 orang. Teknik pengumpulan data yang dilakukan menggunakan lembar observasi dan lembar angket. Metode yang digunakan dalam penelitian adalah statistik deskriptif kuantitatif. Berdasarkan hasil analisis menunjukan bahwa penggunaan model pembelajaran inkuiri terbimbing berbantuan media audio-visual mendapatkan pengaruh yang positif terhadap kemampuan berpikir kritis mahasiswa dengan presentase 93% (Baik sekali). Didukung oleh respon mahasiswa yang positif terhadap penggunaan model pembelajaran inkuiri terbimbing berbantuan media audio-visual dengan presentase 95% (Baik sekali).