Kolesterol merupakan zat berlemak yang diproduksi oleh hati. Kolesterol dapat ditemukan di seluruh tubuh dan berperan penting terhadap fungsi tubuh sehari-hari. Pemeriksaan kolesterol yang dilakukan di laboratorium salah satunya adalah parameter untuk mengetahui penyakit jantung. Pemeriksaan Kolesterol dalam serum digunakan sebagai indiktor penyakit arteri koroner dan aterosklerosis. Selama 24 jam sebelum pemeriksaan, sebaiknya pasien tidak melakukan aktivitas berat karena kelelahan dapat berpengaruh pada hasil pemeriksaan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan hasil pemeriksaan kadar kolesterol total pada pasien puasa dan tidak puasa. Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian analitik dengan rancangan one group pre and posttest design. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan maret 2020.  Populasi penelitian ini adalah seluruh mahasiswa tingkat I dan II Jurusan Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Palembang. Sampel berupa serum dari 30  responden yang diambil secara simple random sampling. Analisis data menggunakan paired t-test. Berdasarkan hasil uji t diperoleh nilai p = 0,134 (p > 0,05) artinya p>α yang berarti tidak ada perbedaan yang bermakna pada kadar kolesterol pasien puasa dan tidak puasa.