Penelitian ini menganalisis butir soal ujian materi sistem pernapasan dalam pelajaran biologi pada Pesantren Moderen di Kota Banda Aceh yang bertujuan untuk mengetahui kualitas butir soal ujian ditinjau dari validitas, reliabilitas, taraf kesukaran, dan daya beda butir soal. Penelitian ini menggunakan pendekatan ex post facto nonexperimental quantitative research dengan mengambil populasi siswa kelas XI IPA Inshafuddin dan siswa kelas MIA XI MAS Babun Najah dengan jumlah populasi sebanyak 164 siswa. Pengambilan sampel berdasarkan proporsional sampling yaitu sebanyak 51 dari SMA Inshafuddin dan sebanyak 69 dari MAS Babun Najah. Hasil analisis terhadap 60 butir 30 butir soal (50%) dinyatakan valid dan 30 butir soal (50%) dinyatakan tidak valid. Reabilitas set soal di dapatkan r=0,82 yang berada pada kategori sangat tinggi dengan formula KR 20. Jika ditinjau dari taraf kesukaran soal didapatkan 9 butir soal (15%) dengan kategori mudah, 44 butir soal (73%) katageri soal sedang, dan 7 butir soal (12%) kategori soal sukar. Dilihat dari daya beda, 1 butir soal ( 2%) memiliki daya beda dengan kategori baik sekali, 8 butir soal (13%) memiliki daya beda kategori baik, 21 butir soal (35%) memiliki daya beda kategori cukup, 20 butir soal (33%) yang memiliki daya beda kategori jelek dan 10 butir soal (17%) dengan kategori tidak baik. Set soal pilihan ganda materi sistem pernapasan dapat digunakan untuk penerapan pembelajaran menggunakan media audio visual pada pesantren moderen Kota Banda Aceh