Salah satu hama utama pada tanaman tembakau adalah ulat grayak (Spodoptera litura Fabricius). Di kalangan petani, dalam pengendalian hama ini banyak ditemui perilaku pencampuran bahan aktif pestisida yang berbeda. Namun, penelitian terkait tentang pencampuran pestisida ini belum banyak dilakukan. Oleh karena itu dilakukan penelitian mengenai pengaruh pencampuran antara bahan aktif fipronil dan diafentiuron terhadap mortalitas dan efek lanjutan hama tanaman tembakau S. litura. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Hasil penelitian menunjukkan bahwa interaksi antara bahan aktif fipronil dan diafentiuron terhadap efek lanjutan larva S litura menghasilkan efek campuran yang aditif.  Oleh karena itu sebaiknya antara kedua bahan aktif tersebut tidak dilakukan pencampuran. Campuran antara fipronil dan diafentiuron secara signifikan tidak memberikan pengaruh dalam meningkatkan toksisitas, karena tanpa dilakukan pencampuran kedua bahan aktif tersebut dapat mengendalikan hama S. litura dengan baik. Hal ini ditunjukkan oleh nilai Lethal Concentration (LC) yaitu LC 10, 15 dan 25 pada fipronil lebih rendah dibandingkan diafentiuron, yang berarti bahwa pestisida berbahan aktif fipronil memiliki toksisitas lebih tinggi dibandingkan diafentiuron. Hasil ini menyarankan bahwa pestisida bahan aktif fipronil lebih efektif dalam meningkatkan mortalitas S. litura.Kata Kunci : Spodoptera litura, mortalitas, pestisida kimia, fipronil, diafentiuron