Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pertumbuhan dan produksi jamur tiram putih dan jamur kuping pada berat substrat yang bervariasi serta nilai R/C rasio analisis usaha taninya. Penelitian dilakukan rumah jamur Fakultas Pertanian Universitas Islam Malang pada bulan Maret sampai bulan Agustus 2017. Penelitian menggunakan rancangan acak lengkap faktorial yang terdiridari dua faktor. Faktor pertama adalah jenis jamur (J) terdiri dari J1(jamur tiram putih) dan J2 (jamur kuping). Faktor kedua adalah berat substrat (B) terdiri dari B1 (1 kg) , B2 (1,5 kg), B3 (2 kg), dan B4 (2,5 kg). Hasil penelitian menunjukkan pertumbuhan dan produksi jamur tiram putih dan jamur kuping  terbaik pada perlakuan B4 (berat substrat 2,5 kg) dengan hasil bobot segar total badan buah jamur tiram putih sebesar 372,43 g dan jumlah badan buah sebesar 31,14 buah. Pada jamur kuping bobot segar total badan buah sebesar 136,86 g dan jumlah badan buah 10,17 buah. Pada nilai efisiensi biologi (EB) menunjukkan berat substrat 1 kg memiliki nilai tertinggi yaitu 11,05 %. Analisis usaha tani pada perlakuan B4 (berat substrat 2,5 kg) memiliki nilai penerimaan usaha tani dan nilai R/C rasio tertinggi yakni sebesar Rp.365.000,00,- dan 0,31. Kata kunci: jamur tiram putih, jamur kuping, variasi berat substrat, produksi