Penelitian ini bertujuan pengaruh penggunaan asesmen portofolio pada perkuliahan Perilaku Hewan terhadap mahasiswa Pendidikan Biologi semester V di Universitas Cokroaminoto Palopo tahun pembelajaran 2019/2020. Penelitian ini merupakan penelitian quasi eksperimen. Sampel penelitian ini adalah mahasiswa Pendidikan Biologi, kelas VA dan kelas VB yang diambil secara purposive sampling. Teknik pengambilan data diperoleh melalui tugas-tugas terstruktur yang dihasilkan oleh mahasiswa berupa LKM, analisis kritis, studi kasus, makalah, jurnal belajar dan kuis. Portofolio dinilai oleh mahasiswa dan dosen dan dikategorikan dalam 4 kriteria yaitu kelengkapan, kejelasan, kesesuaian dan dokumentasi. Untuk mengumpulkan data hasil belajar mahasiswa pada mata kuliah Perilaku Hewan dilakukan menggunakan tes.  Data dianalisis dengan menggunakan uji t. Hasil penelitian menunjukkan bahwa: terdapat pengaruh yang signifikan terhadap penggunaan asesmen portofolio pada perkuliahan Perilaku Hewan terhadap hasil belajar mahasiswa Pendidikan Biologi Universitas Cokroaminoto Palopo.