Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh lama penyimpanan semen pada suhu4ºC dalam pengencer Ringer’s Lactat terhadap kualitas spermatozoa Ayam Magon. Ayam Magonadalah ayam petarung handal. Materi yang digunakan adalah pengencer Ringer’s Lactat, semenAyam Magon umur 12 bulan dan Eosin Negrosin. Metode penelitian eksperimental denganRancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 5 ulangan. Perlakuan adalah Lamapenyimpanan yaitu P0 (0 Jam), P1 (8 Jam), P2 (16 Jam), dan P3 (24 Jam). Data yang diperolehdianalisa dengan Analisa of varian (ANOVA) dan dilanjutkan uji Beda Nyata Terkecil (BNT).Variabel yang diamati adalah Motilitas, Viabilitas dan abnormalitas spermatozoa. Hasil analisismenunjukkan bahwa perlakuan lama penyimpanan Semen Ayam Magon dalam pengencerRinger’s Lactat pada suhu 4C memberikan pengaruh yang sangat nyata (P<0,01) terhadapkualitas Spermatozoa Ayam Magon. Rata-rata Motilitas Spermatozoa (%) adalah P0 = 77,60, P1=67,00, P2= 50,80 dan P3 = 41,80. Viabilitas (%) P0 = 74,40, P1 = 67,20, P2 = 51,80 dan P3 =40,40. Abnormalitas (%) P0 = 10,80, P1= 11,40, P2 = 15,20 dan P3 = 18,60. Kesimpulan adalahlama penyimpanan Semen Ayam Magon dalam pengencer Ringer’s Lactat pada suhu 4Cberpengaruh tehadap motilitas individu, viabilitas dan abnormalitas spermatozoa. Penyimpanansemen sampai 24 jam masih memberikan hasil yang baik terhadap kualitas spermatozoa sehinggamasih layak digunakan untuk Inseminasi Buatan (IB).Kata kunci : Penyimpanan, Ringer’s lactat, Kualitas, Semen, Ayam Magon