Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui: (1) kualitas item secara kualitatif Ulangan Akhir Semester (UAS) Genap Mata Pelajaran Biologi Kelas X Tahun Ajaran 2014/2015 di SMA yang mengimplementasikan Kurikulum 2013 di Kabupaten Sleman dari aspek materi, konstruksi, dan bahasa, (2) kesesuaian/fit item dengan Model Rasch dan reliabilitas bila dianalisis menggunakan program Quest, (3) pemenuhan persyaratan item sebagai tes untuk mengukur prestasi hasil belajar peserta didik, dan (4) pendeteksian adanya bias item/DIF (Differential Item Function) antarsekolah yang mengimplementasikan Kurikulum 2013 di Kabupaten Sleman. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif. Objek penelitian ini berupa perangkat soal UAS Genap Mata Pelajaran Biologi Klas X Tahun Ajaran 2014/2015 berupa soal dan kunci jawaban, lembar jawab, serta indikator capaian kompetensi pada RPP (Rencana Pelaksanaan Pembelajaran) yang digunakan oleh guru. Sampel yang digunakan berupa item soal pilihan ganda yang berjumlah 50 item UAS Semester Genap Biologi Kelas X program MIA Tahun Ajaran 2014/2015 yang disusun oleh MKKS Kabupaten Sleman. Teknik pengambilan sampel menggunakan purposive sampling dengan pertimbangan item yang dianalisis disekolah yang sudah mengimplementasikanKurikulum 2013yang direkomendasikan oleh Dinas Pendidikan Kabupaten Sleman. Analisis dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Analisis kualitatif item menggunakan lembar telaah soal pilihan ganda yang ditinjau dari aspek materi, konstruksi, dan bahasa, sedangkan analisis kuantitatif menggunakan program QUEST yang didasarkan pada teori klasik dan modern. Hasil penelitian menunjukkan bahwa (1) kualitas item UAS kurang baik secara kualitatif karena sebanyak 88% item memenuhi aspek materi, 60% item memenuhi aspek konstruksi, dan 36% item memenuhi aspek bahasa, (2)  item UAS fit dengan Model Rasch dan memiliki reliabilitas tinggi, (3) item UAS memenuhi persyaratan sebagai tes untuk mengukur prestasi belajar, dan (4) terdapat item yang teridentifikasi bias pada 7 sekolah yang mengimplementasikan Kurikulum 2013 di Kabupaten Sleman.Kata kunci: Analisis item, UAS Genap Biologi, Kurikulum 2013, QUEST, Model Rasch, tes prestasi belajar, bias item/DIF